Parallel analysis of tri-molecular biosynthesis with cell identity and function in single cells.

Cellular products derived from the activity of DNA, RNA, and protein synthesis collectively control cell identity and function. Yet there is little information on how these three biosynthesis activities are coordinated during transient and sparse cellular processes, such as activation and differentiation. Here, we describe Simultaneous Overview of tri-Molecule Biosynthesis (SOM3B), a molecular labeling and simultaneous detection strategy to quantify DNA, RNA, and protein synthesis in individual cells. Comprehensive interrogation of biosynthesis activities during transient cell states, such as progression through cell cycle or cellular differentiation, is achieved by partnering SOM3B with parallel quantification of select biomolecules with conjugated antibody reagents. Here, we investigate differential de novo DNA, RNA, and protein synthesis dynamics in transformed human cell lines, primary activated human immune cells, and across the healthy human hematopoietic continuum, all at a single-cell resolution

Evaluation of the ARHGAP21 expression in cardiac cells and its function

Orientador: Sara Terezinha Olalla SaadTese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias MedicasResumo: Estímulo mecânico é um dos principais eventos envolvidos na hipertrofia cardíaca que afeta vários componentes de vias de sinalização do miocárdio. Recentemente, um novo transcrito altamente expresso em músculo cardíaco, denominado de ARHGAP21, foi descrito como um membro da família de proteínas Rho GAP, que demonstrou atividade catalítica sobre Cdc42 e interação com ARF1, ARF6 e a-catenina, proteínas importantes do remodelamento do citoesqueleto e junções aderentes. No presente estudo, tivemos como objetivo analisar a expressão da ARHGAP21 em resposta ao estresse mecânico agudo em corações de ratos adultos, e sua associação com FAK e PKC?. Utilizando-se fracionamento subcelular, microscopia confocal e eletrônica, demonstramos que ARHGAP21 relocaliza-se das regiões nucleares e miofilamentos para linhas Z, discos intercalares e costâmeros de cardiomiócitos submetidos à sobrecarga de pressão, sugerindo que esta roteína pode desenvolver uma importante função no remodelamento cardíaco. Além do mais, ensaio de imunoprecipitação mostrou que ARHGAP21 interage com PKC? e FAK em ratos controle, submetidos à coarctação da aorta e espontaneamente hipertensos (SHR). Três diferentes regiões de FAK, contendo cauda de GST acoplada, foram utilizadas em ensaio de ligação in vitro, demonstrando que ARHGAP21 se liga à porção carboxi terminal de FAK. Além disso, ARHGAP21 associa-se à PKC? fosforilada em Thr410 em o-imunoprecipitados de extratos protéicos de ratos controle e SHR. Entretanto, ARHGAP21 associa-se apenas à FAK fosforilada em Tyr925 em SHR. Também foi verificado que PKC? é fosforilada por estímulo mecânico. Estes resultados sugerem que ARHGAP21 pode atuar como uma molécula sinalizadora ou proteína adaptadora das vias de sinalização de FAK e PKC? em cardiomiócitos, provavelmente desempenhando importante função durante estresse cardíacoAbstract: Mechanical stimulus is one of the major events involved in cardiac hypertrophy, and affects components of essential myocardium signaling pathways. Recently, we described a highly expressed mRNA in the cardiac muscle as a member of the RhoGAP family of proteins, ARHGAP21, which demonstrated GAP activity over Cdc42 and interacted with ARF1, ARF6 and a-catenin important proteins of the cytoskeleton assembly and adherent junctions. In the present work, we aimed to analyze the expression of ARHGAP21 in response to acute mechanical stress in the adult rat heart and its association with FAK and PKC? proteins. By subcellular fractionation, confocal and immunoelectron microscopy, we demonstrated that ARHGAP21 is relocated from the nucleus to the plasma membrane, Z-lines and costameres of cardiomyocytes submitted to pressure overload conditions, suggesting that this protein may develop a role in cardiac remodeling. Furthermore, immunoprecipitation assay showed that ARHGAP21 interacted with PKC? and FAK in control rats, rats submitted to aortic clamping and spontaneously hypertensive rats (SHR). Using three different GST-tagged regions of FAK, we found that ARHGAP21 binds to the carboxyl terminal portion of FAK. Moreover, ARHGAP21 binds to PKC? phosphorylated on Thr410 in co-immunoprecipitates of protein extracts from sham control rats and SHR. However, ARHGAP21 only binds to FAK phophorylated on Tyr925 of SHR. We have also shown that PKC? is phosphorylated by mechanical stimuli. Altogether, these results suggest that ARHGAP21 may act as a signaling molecule or scaffold protein of FAK and PKC? signaling pathways in cardiomyocytes, probably developing an important function during cardiac stressDoutoradoBiologia Estrutural, Celular, Molecular e do DesenvolvimentoDoutor em Fisiopatologia Medic

RELATÓRIO FINAL DE ESTÁGIO DOCENTE DO ENSINO FUNDAMENTAL NO CENTRO DE EDUCAÇÃO DE JOVENS E ADULTOS - CEJA

RELATÓRIO DE ESTÁGI

FREUD E SARTRE: DA DETERMINAÇÃO PULSIONAL À RESPONSABILIDADE

Na obra Além do princípio de prazer (1920/2010a), Freud introduz nas teorias psicanalíticas o conceito de pulsão de morte, como presente no processo vital interagindo como uma força em conflito dentro de um quadro psíquico mais amplo, no qual as explicações das ações humanas eram procuradas. Introduzir este conceito era uma tentativa de responder, entre outras, a questão: por que algumas ações ou pensamentos característicos do comportamento humano, pensando este em relação à questão das neuroses traumáticas, por exemplo, não obedecem ao “princípio de prazer”? A observação clínica levou Freud (1930/2010b) a perceber certos comportamentos como: compulsão a repetição do desprazer; sentimento de culpa e necessidade de punição, como demonstrativos deste tipo de análise, decorrendo daí a necessidade de rever suas teorias. Levando em consideração que o “princípio de prazer” era, até então, considerado por Freud (1900/2001) como aquele que rege o aparelho psíquico na sua tendência a um menor grau de excitação possível que tenderia ao prazer e, partindo desta perspectiva, questionamos: o que explicaria a repetição de movimentos dolorosos como consequência de um aumento de excitabilidade e, portanto, a aparente escolha por um quadro de sofrimento? Para Freud parece que essa escolha não é feita de modo plenamente consciente, enquanto para Sartre (1943/2014b) não pode ser imputada a um inconsciente. Sartre (1943/2014b) não ignora que as escolhas da realidade humana frequentemente constituem um mundo de sofrimento, no entanto a responsabilidade por esse tipo de ação contraditória pode ser creditada a realidade humana e não estaria relacionada a elementos pulsionais conforme afirma Freud.Enquanto para Freud (1900/2001, p. 523), as ações dos homens devem ser analisadas levando-se em consideração os impulsos inconscientes que irrompem na consciência, mesmo que muitas vezes eles sejam neutralizados pelas forças reais da vida, Sartre (1943/2014b) contesta decisões fundamentadas em um “eu” interior, que se sustente na noção de inconsciente e atribui a realidade humana plena liberdade para fazer escolhas responsáveis, indo de encontro a noção de aparelho psíquico regido por pulsões, implícito nas teorias freudianas

A ÉTICA DA RESPONSABILIDADE NA OBRA O SER E O NADA

Este resumo expandido tem como objetivo principal analisar a relação entre os conceitos de liberdade e responsabilidade, propostos por J-P Sartre, na obra O Ser e o Nada (2014/1943). Nesta obra, Sartre define a liberdade em termos ontológicos enquanto que a responsabilidade parece definir-se em termos morais. Se não há motivações a priori para as nossas ações, se os valores só aparecem na e depois da liberdade, então, não há um bem ou um mal que nos guia e que justifica nossas ações. Não obstante, se estas ações, praticadas por nós, são escolhidas livremente, então, devemos assumir que o mundo que elas criam, no qual tais valores aparecem, é nossa responsabilidade. Para Sartre, “a existência precede a essência” (SARTRE, 2010, p. 25), o que significa afirmar que a realidade humana não traz consigo uma definição, ou seja, ela é aquilo que faz de si ao longo de um processo histórico. Este é, segundo Sartre, o primeiro princípio do existencialismo. Então, para o autor, apesar de não haver um determinismo psicológico ou qualquer outro tipo de determinismo guiando nossas ações, precisamos assumir todas as consequências que nossas ações criam. Partindo do princípio citado, o autor considera que podemos colocar a realidade humana em posse do que é, a saber, um projeto que não encontra em si nem no mundo justificativas. Podemos atribuir-lhe total responsabilidade pelos seus atos. A questão principal trabalhada na pesquisa, é, portanto, se diante destas colocações, apontadas por Sartre, podemos pensar em uma implicação ética, na O Ser e o Nada (2014/1943), a partir da reflexão ontológica sobre a liberdade

O OLHAR COMO EXPERIÊNCIA ALIENANTE

Jean-Paul Sartre, descreve na obra O Ser e o Nada (1943/2014), sobre uma concepção filosófica a partir doque ele defende como existencialismo. O existencialismo parte da premissa de que: “a existência precede aessência” (2014, p.695), em contraposição ao pensamento vigente que se sustenta na premissa contrária “aessência precede a existência”.1 O autor afirma que a premissa, acima citada, é o primeiro princípio doexistencialismo e descreve, a partir daí, a realidade humana como “fazendo-se”, liberdade plenamenteresponsável por suas ações no mundo concreto. Inclusive, Sartre apresenta-se como um exemplo da sua filosofia,ao fazer-se um autor engajado nas situações importantes da sua época. Existiu como uma realidade humanavivendo intensamente cada momento histórico e sustentou as afirmações contidas em seus textos e obras quandoa questão era agir sendo esta liberdade. No que concerne ao tema proposto, “O Olhar como alienante”, Sartredescreve, a partir da questão da existência do Outro, na obra O Ser e o Nada (1943/2014), na qual ele explicaque uma das modalidades em que o Outro aparece, para a realidade humana, é através de uma relação deobjetividade, como uma das modalidades da presença do Outro a mim: O Olhar do outro dirigido a mim que fazcom que eu perca a subjetividade e me experiencie como objeto. Esta é uma experiência alienante que eu, comorealidade humana, procuro evitar. O ponto de partida para se chegar a questão do olhar, como alienante, éentendermos como o Outro aparece para a realidade humana, na perspectiva de Sartre

Proliferation tracing with single-cell mass cytometry optimizes generation of stem cell memory-like T cells.

Selective differentiation of naive T cells into multipotent T cells is of great interest clinically for the generation of cell-based cancer immunotherapies. Cellular differentiation depends crucially on division state and time. Here we adapt a dye dilution assay for tracking cell proliferative history through mass cytometry and uncouple division, time and regulatory protein expression in single naive human T cells during their activation and expansion in a complex ex vivo milieu. Using 23 markers, we defined groups of proteins controlled predominantly by division state or time and found that undivided cells account for the majority of phenotypic diversity. We next built a map of cell state changes during naive T-cell expansion. By examining cell signaling on this map, we rationally selected ibrutinib, a BTK and ITK inhibitor, and administered it before T cell activation to direct differentiation toward a T stem cell memory (TSCM)-like phenotype. This method for tracing cell fate across division states and time can be broadly applied for directing cellular differentiation

ANÁLISE FACETADA: EM BUSCA DE UMA CLASSIFICAÇÃO PARA O TEATRO

The goal of this work was to develop a multifaceted classification system for theatre. After a survey of the classification types, done to proceed the treatment and organization of the Search Center and Memory Theatre of Galpão Cine Horto, was verified the necessity to develop a system that represent the specific character and complexity of the theatre. Thus, first it was done a critical analysis of the actual systems to classify theater issues and after, a literature review about the theory evolution of the classification systems. A field description was done to present its peculiarities and to understand the theoretic production process. Based on the terms that characterize theatre as specific area of knowledge, it was possible to propose a classification system to represent their different facets.A proposta deste trabalho foi desenvolver um sistema classificatório facetado para o campo do teatro. Após um levantamento dos tipos de classificação existentes no trabalho de tratamento e organização do acervo do Centro de Pesquisa e Memória do Teatro do Galpão Cine Horto, constatou-se a necessidade de desenvolver um sistema que representasse a especificidade e complexidade do “teatro”. Assim, realizou-se uma análise crítica dos sistemas atualmente adotados para classificar o campo do teatro, seguida de uma revisão bibliográfica acerca da evolução das teorias e sistemas de classificação. Foi realizada uma descrição do campo para apresentar suas peculiaridades e compreender o processo de produção teórica. Com base no levantamento de termos que caracterizam o teatro como área específica do conhecimento, foi possível propor um sistema de classificação capaz de representar suas diferentes facetas

EDUCACIÓN INCLUSIVA Y FORMACIÓN DOCENTE: ¿QUÉ REVELAN LOS CURRÍCULOS DE LOS CURSOS DE LICENCIATURA?

The narrative that underlies Inclusive Education goes, among other aspects, through teacher education that is capable of considering the different aspects of individual students and their learning. In this sense, it is important to understand to what extent the curriculum for teacher training has been configured to allow discussions and reflections on the diversity of the student body. The data presented herein is an excerpt from the doctoral research entitled Formation of Teachers and Inclusive Education: An Analysis Based on the Critical Theory of Society. This article aims to identify and characterize in the curriculum of eleven undergraduate courses from a public university in Bahia disciplines related to the Inclusive Education approach. The research has a qualitative approach, and through document analysis it examines the flowcharts and Academic Curricular Projects (PACs) related to the teacher training courses. Content analysis was the chosen data analysis methodology. The study shows that Biological Sciences, Physical Education, History and Pedagogy courses are those that offer mandatory and / or optional subjects related to Inclusive Education in their programs. The absence of disciplines that addresses Inclusive Education in universities precludes a fundamental debate, especially in undergraduate courses, as the enrollment of students with disabilities in regular classes has been increasing significantly.El discurso que fundamenta la Educación Inclusiva pasa, entre otros aspectos, por una formación docente que sea capaz de considerar las diferencias de los estudiantes y su aprendizaje. En este sentido, es interesante entender hasta qué punto los currículos de los cursos de formación de docentes se han configurado para permitir debates y reflexiones sobre la diversidad de los estudiantes. Los datos aquí presentados son un recorte de la investigación doctoral titulada Formación de docentes y educación inclusiva: un análisis a la luz de la teoría crítica de la sociedad. Este artículo tuvo como objetivo identificar y caracterizar en el currículo de once cursos licenciatura en una universidad pública de Bahía, disciplinas relacionadas con el enfoque de la Educación Inclusiva. La investigación tiene un enfoque cualitativo y, por medio del análisis documental se analizaron los diagramas de flujo y los Proyectos Académicos Curriculares (PAC) de los cursos de formación docente. El análisis de contenido fue la metodología de análisis de datos elegida. El estudio evidenció que los cursos de Ciencias Biológicas, Educación Física, Historia y Pedagogía son los que ofrecen asignaturas obligatorias y/o opcionales relacionadas con la Educación Inclusiva en sus currículos. La ausencia de signaturas que aborden la educación inclusiva en las universidades impide un debate fundamental, especialmente en las licenciaturas, ya que el número de matrículas de estudiantes con discapacidades en clases regulares viene aumentando significativamente.O discurso que fundamenta a Educação Inclusiva passa, entre outros aspectos, por uma formação docente que seja capaz de considerar as diferenças dos alunos e suas aprendizagens. Neste sentido, é interessante entender em que medida os currículos dos cursos de formação de professores têm sido configurados para permitir discussões e reflexões sobre a diversidade dos alunos. Os dados aqui apresentados são um recorte da pesquisa de doutorado intitulada Formação de Professores e Educação Inclusiva: Uma Análise à Luz da Teoria Crítica da Sociedade. Este artigo objetivou identificar e caracterizar no currículo de onze cursos de licenciatura, de uma universidade pública baiana, disciplinas relacionadas a abordagem da Educação Inclusiva. A pesquisa tem abordagem qualitativa e por meio da análise documental foram analisados os fluxogramas e Projetos Acadêmicos Curriculares (PACs) dos cursos de formação de professores. A análise de conteúdo foi a metodologia de análise de dados escolhida. O estudo evidenciou que os cursos de Ciências Biológicas, Educação Física, História e Pedagogia são os que ofertam disciplinas obrigatórias e /ou optativas relacionadas à Educação Inclusiva em seus currículos. A ausência de disciplinas que abordem a educação inclusiva nas universidades impossibilita um debate fundamental, sobretudo nas licenciaturas, visto que o número de matrículas de alunos com deficiência nas classes regulares vem crescendo significativamente